益气活血方对肾间质纤维化大鼠血清IL-10、IFN-γ含量的影响

终末期肾脏病患者可以引起伴有急性时相反应的炎症状态如IL-10、 IFN-γ增高，因此如何抑制其炎症状态对防止其进展有重要意义。由黄芪、当归、川芎、赤芍、丹参等中药组成的益气活血方剂, 可以益气活血,保护肾功能。本文以大鼠单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化动物模型, 选用血管紧张素转换酶抑制剂福辛普利钠为对照, 旨在通过观察益气活血法对肾间质纤维化大鼠肾脏组织血清IL-10、IFN-γ含量的影响, 探讨益气活血法对肾间质纤维化中的炎症状态的抑制作用，从而防止肾间质纤维化进展，研究其作用机制, 为临床相关病症治疗应用与研究提供必要的理论依据。

1材料和方法

1.1实验动物和药物实验动物：清洁级健康Wister雄性大鼠120只，体重180～200g，由中国医学科学院实验动物中心（许可证号：SCXK-京-2005-0013）提供。

1.2实验药物及试剂：福辛普利钠批号：0607088购于上海罗氏有限公司，益气活血法中药提取液(生黄芪15 g ,当归10 g ,赤白芍10 g ,丹参30 g ,黄芩10 g ,车前草15 g ,牛膝15 g 等)经水提醇沉得4. 4 kg／L 生药提取液, 由我院制剂室提供, 批号：20001028。

1.2实验试剂 美国R&D Systems 公司提供包被抗体、标准品、生物素二抗。

1.3动物模型建立和分组

将大鼠36只，采用随机数字法分为6组：模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组、假手术组，每组6只动物,其中前5组行单侧输尿管梗阻致肾小管间质纤维化模型手术:用2 %戊巴比妥钠按40mg/kg腹腔注射麻醉,麻醉生效后将大鼠固定、去毛备皮,打开腹腔找到左侧输尿管,结扎后缝合切口,关闭腹腔。假手术组：打开大鼠腹腔后分离左侧输尿管,并不结扎即关闭腹腔。其中中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组，于手术前2天给予灌胃给药, 每日1次, 连续3周。大剂量组0.072ml/kg.d, 中剂量组0.036ml/kg.d, 小剂量组0.018ml/kg.d，(分别为人服用量的20、10、5倍)，西药组蒙诺10mg/kg.d(相当于人剂量的20倍)。模型组及假手术组用相同体积的生理盐水灌胃。各组于术后21天乙醚麻醉后处死大鼠6只.留取大鼠动物血清。

1.4，采用酶联免疫吸附反应（ ELISA ）方法检测各组动物血清IL-10、IFN-γ含量。

1.5统计学分析使用SPSS11.0软件对数据进行单因素方差分析，P<0.05为差异有显著性。

2 结果

肾间质纤维化模型组大鼠造模后，其血清IL-10、IFN-γ含量显著高于假手术组（P＜0.001），经中药治疗后， IL-10、IFN-γ含量发生明显降低，与西药对照组比较，中药对IFN-γ的影响优于西药组，而对IL-10的影响则不如西药组。

表3-1 益气活血方对肾间质纤维化大鼠血IL-10含量的影响

#p<0.05，##p<0.01 ，与正常组比较；* p<0.05， **p<0.01 ，与模型组比较

#p<0.05，##p<0.01 ，与正常组比较；* p<0.05， **p<0.01 ，与模型组比较

3 讨论

健康人外周血单核细胞中无细胞因子的基因表达,不产生炎症因子,但肾功能衰竭时机体内毒性物质的堆积可导致激活,肾脏清除细胞因子能力降低,使血浆细胞因子水平升高，另外,研究表明,尿毒症未透析患者由于肝脏网状内皮系统功能障碍,清除内毒素能力下降,血中已有一定量的内毒素,这均提示尿毒症未透析状态可以导致激活并诱导细胞因子基因转录,产生炎症因子增加;尿毒症状态与已改变的免疫反应有关,在终末期肾脏病患者中有多种因子,它们能刺激单核/巨噬细胞诱导胞浆释放，若干研究证实炎症细胞胞浆分裂在尿毒症患者透析之前已增加,这就提示尿毒症本身可以引起伴有急性时相反应的炎症状态，如IL-10、 IFN-γ异常释放均与慢性肾衰的炎症反应密切相关[1]。

1989年Fioretin等首先报道了细胞因子的新成员，即白细胞介素一10(interleukin-10, IL-10)，因发现它有抑制多种细胞因子合成的功能，最初被称为细胞因子合成抑制因子(cytokine synthesis inhibitoryfactor, CSIF )，它主要由TH2细胞、单核巨噬细胞所分泌，此外TH1细胞、角质细胞和活化的B细胞等也能产生少量的IL-10。慢性肾衰时，IL-10的分泌明显增强，患者血清IL- 10水平升高，增高的IL- 10能抑制脂多糖诱导的单核吞噬细胞产生多种炎症介质如IL- 1. IL- 6. IL- 8及TNF等，其作用可能是抑制炎性细胞因子对肾小球系膜细胞的多种炎症反应，从而使患者肾功能得以保护和改善,从而对肾脏有保护作用[2].故国内中医药研究多为应用中药后血清IL- 10均为升高，而我们的结果恰恰相反，大鼠单侧输尿管结扎术建立的肾间质纤维化模型，其血清IL-10含量显著高于假手术组（P＜0.001），经中药治疗后， IL-10含量发生明显降低.。可以认为，应用中药后，由于其炎症的改善， IL- 10降低了。说明益气活血法对肾间质纤维化中的炎症状态有抑制作用，正如人体炎症时血白细胞升高，是对人体的保护作用，应用抗炎药物后，白细胞降低，说明这个药物有较好的抗炎作用。

许多研究表明IFN-γ在自身免疫性肾炎的发展中起到关键作用，可促进肾损伤[3]。国外学者发现IgA肾病以及其它增生性肾炎的PBMC上清液的IFN-γ含量高于正常人，与肾组织的IFN-γ含量相一致，而且PBMC上清液中的IFN-γ升高水平与肾小球滤过率的下降及肾脏病理损害程度相平行，但也有动物实验发现重组IFN-γ能抑制鼠系膜细胞的生长，对肾小球损伤有保护作用[4-6]。本研究结果显示肾间质纤维化模型组大鼠造模后，其血清IFN-γ含量显著高于假手术组（P＜0.001），经中药治疗后，IFN-γ含量发生明显降低，与西药对照组比较，中药对IFN-γ的影响优于西药组，因此较支持前一种观点，认为活化的T淋巴细胞可能通过分泌过多的IFN-γ参与了肾间质纤维化的免疫性肾损伤过程，结果还显示IFN-γ可能通过系膜基质增多而影响肾小球血液动力学以及对大分子物质的通透性，导致肾间质纤维化。

终末期肾脏病患者可以引起伴有急性时相反应的炎症状态如IL-10、 IFN-γ增高，因此如何抑制其炎症状态对防止其进展有重要意义。我们用大鼠单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化动物模型观察到，大鼠造模后血清中IFN-γ和IL-10水平明显高于假手术组，经益气活血中药干预后，IFN-γ和IL-10含量明显降低，可能是益气活血中药发挥治疗肾纤维化作用的靶点之一。

参考文献

1 吴元俊 白细胞介素10在人类肾小球疾病肾组织中的表达及其对系膜细胞的作用和机制探讨 南京医科大学博士学位论文。

2 齐法莲， 徐军， 武翠华，等。慢性肾衰患者血清L- 18. IL- 10. SL - 2R、TNF- a水平变化. 放射免疫学杂志,2006;19(3):178-179

3 向莉, 高小夏, 潘家荣。慢性肾小球肾炎患者血清IFN γ, IL- 10的变化及意义 中国临床医学，2006；13（2）：269-272

4 MasutaniK ,T aniguchiM ,N akashimaH ,et a l.U p-regulatedi nterleukin -4 p ro duction peripheralT -h elperce llsin i diopathicm embranous nep hor pa thy.N ephrolD ialT ransplant[J].2 004,19(3):580-586.

5 FutrakulN ,S iriviriyakulP ,P anichakulT ,e ta l.G lomerulare ndothe lia lc y totoxicitya ndd ysfunctioni nn ephrosisw ithf ocals egmental glo me ru losclerosis[J].C linH emorheolM icrocorc,2 003,29(3-4),469-47 3 .

6 KitchingA R,K aterelosM ,M udgeS J,e ta l.I nterleukin-1oi nhibitsexp er ime ntalm esangialp roliferativeg lomerulonephritis[J].C linE xpIm m un ol,2002,128(l):36-43.