荧光原位杂交技术（FISH）技术在乳腺疾病中的应用

荧光原位杂交技术(Florescence In-Situ Hybridization简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。

与传统的免疫组织化学法（IHC）相比，FISH具有良好的稳定性和可重复性。目前免疫组织化学法正广泛应用于肿瘤等多个领域的临床诊断。免疫组化的检测对象是疾病相关的蛋白。由于蛋白的表达和本身的构象受各种因素的影响很大（例如酸、碱和变性剂），检测条件的稳定性对检测结果至关重要。此外，免疫组化检测结果的判断依赖于检测者对显色结果的主观判断，对于一些弱阳性的结果，不同的检测者容易产生分歧。上述的因素都可能影响医生对病情的最终诊断。荧光原位杂交技术检测的对象是细胞中的DNA，致密的双螺旋结构使DNA可以历经千百万年而依然保持良好，其结构稳定，不易被环境条件影响，为荧光原位杂交技术的稳定提供了良好的基础。此外，荧光原位杂交结果的判定借助于对荧光的颜色判断和信号计数，客观地量化了检测地结果。如果借助于相应的FISH操作系统和染色体成像系统就能实现整个FISH操作的自动化，最大限度的降低操作者和检测者的主观因素，确保结果的准确性。此外，通过FISH可以对染色体或特定基因的数目异常，特定片断的缺失、易位和重排进行诊断研究。

荧光原位杂交技术在肿瘤疾病分型诊断领域的应用：随着生命科学研究的深入，已经开发了许多针对肿瘤的有效药物。但是这些药物的使用依赖于对患者病情准确而及时地诊断。目前传统的肿瘤诊断手段是免疫组织化学的方法，即利用抗原－抗体的显色反应，对肿瘤相关蛋白进行检测。最终根据组织样本中蛋白显色反应的不同诊断患者的病情。由于蛋白本身的不稳定性和结果判定的主观性，致使免疫组织化学的检测结果容易受病理以外的因素影响。例如对于乳腺癌，致病机理很多，市面上已经有一些针对与淋巴结组织中Her-2基因过表达相关的乳腺癌治疗药物，因此检测Her-2基因不仅具有一般的诊断意义，更直接影响医生的用药及整个治疗方案。面对Her-2蛋白免疫组织化学的检测结果，医生经常为弱阳性结果的判定而苦恼不已。研究表明，Her-2基因的过表达往往伴随着Her-2基因的大量扩增；而在Her-2蛋白没有过表达的组织中，不存在Her-2基因的大量扩增。

FISH检测是目前公认比较准确检测HER2的方法，临床研究证实FISH检测阳性的病人对于赫赛汀具有更高的反应率，可以用于IHC检测后不能明确HER2状况的病人（据ASCO 文摘报道约有20% IHC 0/1+的病人用FISH方法检测为阳性）。

Herceptin是一种针对HER-2/neu异常扩增的靶向治疗药物，能特异性地抑制具有HER-2/neu癌基因扩增的癌细胞的生长，使病人预后大大改善。HER-2/neu扩增是决定Herceptin使用的关键性指标，而检测HER-2/neu的金标准即为FISH。