王成坤
主任医师 副教授
4.2
牙体牙髓科张志民
主任医师 教授
副院长
牙体牙髓科李贺
主治医师
5.0
牙体牙髓科李勋
主治医师
4.0
牙体牙髓科高心
主任医师 教授
3.7
牙体牙髓科张颖丽
主任医师 教授
3.6
牙体牙髓科胡晓春
主任医师 教授
3.6
牙体牙髓科孙淑芬
副主任医师 副教授
3.4
牙体牙髓科洪伟
副主任医师 副教授
3.4
牙体牙髓科刘玉艳
副主任医师 副教授
3.4
王金蕊
副主任医师 副教授
3.3
牙体牙髓科刘霞
副主任医师 讲师
3.3
牙体牙髓科林闽
主治医师 讲师
3.3
牙体牙髓科洪丽华
主治医师 讲师
3.3
牙体牙髓科孟秀萍
主治医师 讲师
3.3
牙体牙髓科任运佳
主治医师
3.3
牙体牙髓科张红
主治医师
3.3
牙体牙髓科王家凤
主治医师
3.3
牙体牙髓科赵洪岩
主治医师
3.3
牙体牙髓科高爽
主治医师
3.3
郑鹏
医师
3.2
牙体牙髓科李玉娇
医师
3.2
牙体牙髓科刘莉
医师
3.2
牙体牙髓科焦珊
医师
3.2
牙体牙髓科李天博
医师
3.2
治疗前 治疗后 我想说的是,前牙微创树脂美学修复需要的更多的是医生的耐心与技巧,患者的配合与领悟,以及后续长期随访的决心,优点:不进行牙齿预备,保护天然牙齿,改变牙齿形态,可塑型及可重复性强,目前最为微创的美学修复方式。缺点:可能需要患者谨慎使用,避免前牙切割硬物,半年左右定期随访观察。目前近两年已进行数十例病例的随访,疗效很好,毕竟几个小时就轻松解决牙齿形态是件很有成就感的事情,所以希望帮助越来越多的患者解决美观问题。 一个小时,轻松中解决间隙问题,将左下前牙瓜子豁一并处理,患者很是满意
辛伐他汀是羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的抑制剂,是目前临床用于降低胆固醇、预防心血管疾病的常用药物。Mundy等首次报道他汀类药物能诱导成骨细胞和骨髓细胞中的骨形成蛋白2(Bone morphological protein2,BMP-2)基因的表达,说明其具有提高骨密度,促进成骨的作用。通过局部应用载辛伐他汀支架增加拔牙窝内TGF-β、BMP-2和VEGF信号分子的表达促进成骨,加速和提高新骨形成的速度与质量,可有效地防止拔牙后牙槽嵴的吸收【1】。另外观察发现,辛伐他汀对损伤造成的牙周组织吸收具有抑制作用并促进缺损组织再生【2】,说明辛伐他汀对牙周组织再生和重建具有积极作用。辛伐他汀口服给药经过肝脏首过代谢后,其生物利用度仅为2.4%,骨组织的吸收则更少;而大量应用辛伐他汀却会导致肌毒性和肝毒性等毒、副作用【3】,加重患者的痛苦和经济负担,因此,不能满足临床应用的要求 。载辛伐他汀支架材料【1】虽然可部分地提高辛伐他汀的生物利用度,降低毒、副作用,但该载辛伐他汀支架材料的缓释效果不是很理想,临床操作不方便,需要进一步改进剂型。本研究是将本实验室制备的载辛伐他汀缓释、控释微球(发明专利号:ZL200810050306.2)与适当赋形剂、防腐剂结合制成可注射性缓释软膏。以大鼠切牙拔牙窝为检测新骨形成的模型,将软膏注入拔牙窝,通过钼靶摄影测量和组织学观察来评价可注射性缓释辛伐他汀软膏促进牙槽骨缺损再生修复的效果。1材料和方法1.1可注射性软膏的合成 实验组(缓释软膏1):精确称取本实验室制备的载辛伐他汀缓、控释微球干燥粉末0.1g(含辛伐他汀0.01g),明胶0.2g,甘油1ml,去离子水2ml。室温下,超声混合均匀呈凝胶状,密封入注射器中。分别以辛伐他汀干燥粉末0.01g和PLGA空白微球粉末0.1g代替载辛伐他汀缓、控释微球干燥粉末,其余成分及工艺相同合成其他相应软膏(缓释软膏2和空白软膏)。所有的软膏经钴60照射消毒、灭菌,4℃保存、备用。1.2动物实验108只清洁级雄性Wistar大鼠(吉林大学实验动物中心),体重(180g±5g)。在22℃,40%湿度,12小时日光循环条件下,自由进食,饮水,标准饲料喂养。大鼠随机分为:①缓释软膏(1)组;②缓释软膏(2)组;③空白软膏组。每组36只。在0.3ml/kg的速眠新注射液(军事医学科学院长春军事兽医研究所)全麻下,拔除右下颌中切牙,实验组和对照组拔牙窝内分别注满相应的软膏,外敷以牙周塞治剂。术后禁食水2小时。喂饲软食2天,连续3天给予氨苄青霉素钠(60mg/kg)。于术后1,2,5,8,11,14周各组分别随机取6只动物,速眠新(0.3ml/kg)麻醉后,采用4%多聚甲醛通过MINI型灌流泵进行恒速灌流固定。固定完全后,分离下颌骨置于4%多聚甲醛内加强固定24小时。1.3 下颌骨标本的钼靶摄影应用钼靶摄影机 (Sitto,IMS公司)对去除软组织的下颌骨标本进行摄影,投照参数为29kv,8-11mAs ,照片通过扫描仪EPSON3490扫描(参数设置:48位全彩,1200dpi),保存图像以备分析。应用图像分析软件IPP6.0(Media Cybermetics,美国)对各组图像的切牙拔牙窝范围的灰度值进行对比分析,评价拔牙窝内骨密度改变的情况。1.4 组织学观察下颌骨标本放入10%EDTA溶液中脱钙,垂直于下颌骨长轴切取从下颌第一磨牙近中邻面至其远中3mm处的连同部分下颌第一磨牙的颌骨组织块,常规脱水、浸蜡、包埋、切片,厚5μm,HE染色,光镜观察。1.5 统计学分析应用统计分析软件SPSS13.0对测定数据进行t检验,以P<0.0 5为差异具有统计学意义。2结果2.1 载辛伐他汀缓释、控释微球干燥粉末(图1)与赋形剂、防腐剂加工合成后成为均匀、稳定的凝胶体,室温放置无沉淀(图2)。该凝胶在37℃下具有一定的流动性,可经由注射器软针头将软膏充分注射到所需部位,操作方便。2.2 动物术后安静,在笼中可自由活动。拔牙窝周围牙龈、粘膜无红肿等异常表现。术后2天可正常进食水, 5天可见拔牙窝表面牙周敷料脱落,完全为上皮组织覆盖。2.3 每个下颌骨标本的钼靶摄影照片经IPP6.0软件分析的结果如图3所示。术后1周,实验组和空白组拔牙窝骨密度接近,未见明显的差别(P>0.05);2周和5周,缓释软膏(2)组的骨密度明显高于缓释软膏(1)组和空白组(P<0.05);5周后,缓释软膏(2)组的骨密度随时间的增加而逐渐降低,空白组从术后1周至14周,骨密度经历先降低后逐渐增加的过程;而缓释软膏(1)组在整个实验周期内的骨密度均较接近,除第2周外,其余时间点间无明显差异(P>0.05)。2.4组织学观察组织学观察发现,随时间的延长,拔牙窝内新生骨小梁的宽度及密度逐渐增加,可见骨改建表现。术后1周,各组间无明显差别,拔牙窝内有炎性细胞浸润。术后2周,缓释软膏(2)组可见较稀疏的编织骨,周围可见成骨细胞;缓释软膏(1)组拔牙窝骨壁邻近区域有少量新骨形成;空白软膏组有少量新骨形成伴有炎性细胞浸润。术后5周,缓释软膏(2)组牙槽窝内可见较密集新生骨;缓释软膏(1)组牙槽窝内可见新生骨增加,并有骨岛形成;而空白软膏组形成的新骨较少且分散,仅限于牙槽窝骨壁附近,伴有炎性细胞浸润。术后8周,缓释软膏(1)组可见致密的编织骨,缓释软膏(2)组牙槽窝内可见新生骨,但较稀疏;空白软膏组周围有较多稀疏的新骨形成。术后11周,缓释软膏(1)、(2)组拔牙窝内均被新生的编织骨代替,但缓释软膏(1)组较(2)组新生骨表面骨沉积线明显,骨小梁更致密。术后14周,缓释软膏(1)组较(2)组新生骨沉积线明显,骨小梁致密,数量多。空白软膏组牙槽窝周边有较多骨小梁形成,牙槽窝内骨小梁较稀疏讨论自体骨移植修复骨组织缺损常导致继发损伤,而且塑形性较差,限制了广泛应用,特别是在较大的骨组织缺损情形下。羟基磷灰石和磷酸三钙植入骨缺损区,缺乏骨诱导性,降解速率与骨形成速率不协调,其应用效果也不理想。PLGA等可生物降解材料降解速率和物理性能可控,但只依靠骨传导成骨,骨形成作用有限。应用骨髓间充质干细胞、转基因技术及骨组织工程【4】等技术治疗骨缺损方面的研究是目前研究的热点之一,但因生物安全性、操作复杂及造价昂贵而不被患者广泛接受。因此,方便、安全、经济、实用的骨组织缺损修复、治疗技术将具有广阔的应用前景。他汀类药物在临床上被广泛应用于降低胆固醇,治疗高脂血症和动脉硬化。体内、外研究发现他汀类药物具有激活成骨细胞、促进骨形成的作用【5,6】。本研究利用实验室前期制备的载辛伐他汀缓释微球为功能成份、配制操作方便的可注射性软膏,应用于大鼠切牙拔牙窝,通过牙槽窝愈合过程中的新骨形成情况来评价载辛伐他汀缓释软膏的成骨效应。通过调节温度,可注射性软膏具有一定的流动性,可经由注射器将软膏充分注满拔牙窝;软膏又具有一定的稳定性,在缺损区可保持一定时间以充分发挥促进成骨的作用。本研究所应用的载体材料及赋形剂等可逐渐降解成羟基乙酸和丙酸,进入三羧酸循环, 最终以CO2和H2O的形式排出体外【7】不影响骨代谢,而且可为新形成的骨组织继续生长提供空间。拔牙窝的愈合过程中主要表现为血凝块的机化,成骨细胞分化、成熟,骨基质的分泌、矿化,类似于骨组织缺损的修复过程。本研究利用大鼠切牙拔牙窝的骨愈合过程评价合成软膏的成骨效应。由于大鼠等小动物的骨组织密度较低,利用对少量矿化组织较敏感的钼靶射影能够更好地分辨细小的骨小梁等微观结构的变化,而且对照射的组织破坏较小,不影响后续的研究。拔牙窝的组织学特征变化的趋势与骨密度改变的情况相对应,术后1周各组间无明显的差别, 说明拔牙窝内的血凝块机化过程是拔牙窝愈合、骨组织修复的必要准备阶段。空白组牙槽窝的骨密度变化与拔牙窝的正常愈合过程类似,先有骨吸收、密度减低的阶段,后逐渐提高,说明骨形成增加。缓释软膏(2)组内的功能药物辛伐他汀仅需扩散和渗透经过明胶等环节,具有较弱的缓释效应,可较快速地发挥药效,牙槽窝内骨密度表现为先逐渐增强后又逐渐减弱,这可能与辛伐他汀初始浓度较大、成骨作用较强,后期随药物的代谢、消耗而减少,局部的药物浓度降低、成骨作用减弱有关。缓释软膏(1)组的功能成份--辛伐他汀需经扩散和渗透等环节释放出来,需要较缓释软膏(2)组更长的时间才能发挥药效,表现为2、5周的促进成骨作用低于缓释软膏(2)组,随着缓释软膏(2)组的辛伐他汀药物浓度降低,而缓释软膏(1)组的辛伐他汀始终以接近匀速地释放,促进成骨的优势逐渐显现出来,5周后牙槽窝的骨密度逐渐提高,新生的骨小梁逐渐增多、增宽。骨缺损修复过程中既有骨形成也有骨吸收【8,9】,在本研究中拔牙窝内新生骨小梁的宽度及密度随时间的延长、药物的作用及代谢而有增减说明骨缺损修复是包括骨形成和骨吸收的骨改建过程。空白组的炎症反应较其余组明显,说明辛伐他汀具有一定的抗炎作用【10】。如将缓释软膏(1)、(2)组合并(复合软膏)应用于拔牙窝,其促进成骨的效应是否更佳有待进一步研究。本实验室合成的可注射性缓释辛伐他汀软膏制备工艺简单,应用方便,通过缓慢释放功能药物,为新骨的形成提供诱导因子又能为新骨生长提供支架,兼具骨传导和骨诱导的双重作用,促进新骨形成;同时,辛伐他汀具有一定的抑菌作用。研究表明可注射性缓释辛伐他汀微球软膏可有效促进牙槽骨缺损的骨再生修复。参考文献1.吴哲,孙宏晨,刘树泰,等。聚乳酸-羟基乙酸-辛伐他汀对拔牙术后剩余牙槽嵴吸收影响的实验研究。 中华口腔医学杂志,2006,41(12):747-750.2.刘树泰,孙宏晨,臧光祥,等。Simvastatin抑制实验性牙周组织吸收的体内研究。实用口腔医学杂志, 2008,24(1):145-1473. Grigioni F, Carigi S, Potena L, et al. Long-Term Safety and effectiveness of statins for heart transplant recipients in routine clinical practice. Transplantation Proceedings.2006,38 (5 ):1507–15104. 杨耀武,毛天球,王磊,等。鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷用于组织工程支架修复颅骨缺损实验研究。北京口腔医学,2007,15(2):84-905.Copaja M, Venegas D, Aranguiz P,et al.Simvastatin disrupts cytoskeleton and decreases cardiac fibroblast adhesion, migration and viability.Toxicology 2012,294(1): 42–496.Hu H, Sung A, ZhaoG,et al. Simvastatin enhances bone morphogenetic protein receptor type II expression. Biochem and Biophy Res Comm. 2006,339 (1) :59–647.Zolnik BS, Burgess DJ. Effect of acidic pH on PLGA microsphere degradation and release. J Controlled Release 2007,122(3):338-3448. Henriksen K, Neutzsky-Wulff A V,Bonewald L F,et al. Local communication on and within bone controls bone remodeling. Bone .2009,44 (6) :1026–10339.Ong K L,Day J S,Kurtz S M,et al. Role of surgical position on interface stress and initial bone remodeling stimulus around Hip resurfacing arthroplasty. J Arthroplasty.2009, 24 (7):1137-114210.Djaldetti M, Salman H, BergmanM,et al. Effect of pravastatin, simvastatin and atorvastatin on the phagocytic activity of mouse peritoneal macrophages. Experimental and Molecular Pathology .2006,80 (2) :160 – 164
他汀类药物能诱导成骨细胞和骨髓细胞中的BMP-2基因的表达,具有促进成骨的作用[1]。辛伐他汀口服给药经过肝脏首过代谢,生物利用度很低,骨组织的吸收更少,远远达不到骨形成部位所需要的剂量;而大量应用辛伐他汀却会对肝脏、肌肉组织等有毒、副作用,因此,常规用药方法已经不能满足应用辛伐他汀促进成骨实验和临床应用的要求 。可以长期释放辛伐他汀又能保持其生物活性的缓释制剂的研究将具有重要的理论意义和应用前景[2]。载药微球已开始应用于组织工程支架,并取得了一定的促进细胞生长、增殖及组织修复效果[3,4],但尚未有关于载辛伐他汀缓释制剂方面研究的报道。可生物降解聚合物载体材料生物相容性良好,在体内较稳定,可生物降解吸收,降解速率及周期可调控,是一种理想的载体材料。其中PLGA应用较广,作为载体、支架已经应用于骨、皮肤和神经等组织再生工程,效果很好。本研究拟利用PLGA制备载辛伐他汀缓释微球,作为应用辛伐他汀的新形式。1. 材料辛伐他汀(美国默克公司);聚乳酸-羟基乙酸(PLGA),购自山东岱罡生物制品公司;聚乙烯醇(PVA),二氯甲烷(CH2CL2),Tween-80,氯化钠(NaCl),均为分析纯,北京化工厂。光学显微镜(Olympus),扫描电子显微镜(SEM)(JEOL JEM-6700F),红外光谱仪(FTIR)Nicolet Avatar360型,紫外-可见光光度计Lambda800,动态光粒子尺寸分析仪Zetasizer-nanozs。2. 方法2.1 PLGA空白微球的制备将0.09克PLGA溶解于3ml二氯甲烷中,使成为均匀混合液,缓慢加入到700rpm搅拌中的30ml 1.5%PVA水溶液(含2%Tween80)中,继续搅拌1.5小时,37℃减压旋转蒸发1小时,除净有机溶剂,18000rpm离心,去离子水洗3次,真空干燥48小时,得到白色粉末。2.2 PLGA载辛伐他汀微球的制备载辛伐他汀微球按如下步骤制备:(1)将PLGA与辛伐他汀按质量比3:1共同溶解于二氯甲烷中,形成均匀的分散液;(2)1.5%的PVA水溶液加入吐温80(2%体积比)和氯化钠,700rpm电动搅拌,持续30分钟;(3)将(1)溶液缓慢加入到(2)溶液中,700rpm,连续搅拌1.5小时;(4)37℃减压蒸发1小时,以充分去除微球中的有机溶剂,18000rpm离心10分钟、水洗、真空干燥48小时,获得载辛伐他汀微球粉末。2.3 PLGA载辛伐他汀微球及空白微球的检测分别取干燥的PLGA载辛伐他汀微球及空白微球粉末0.01g,超声分散到2ml去离子水中,分别滴在载玻片、硅片上,真空干燥,相应处理后,通过光学显微镜和扫描电镜观察微球表面形态;其余分散液应用动态光粒子尺寸分析仪测定微球粒径。取干燥的载辛伐他汀微球粉末0.03g,加入1ml乙腈和2ml 0.1M磷酸盐缓冲液,24小时后,紫外-可见光光度仪检测、分析,以确定辛伐他汀是否包入微球及计算载药量、包封率。计算方法:理论载药量=药物总量/ 药物与聚合物总量*100%;实际载药量=微球内的药物总量/微球总量*100% ;包封率=实际载药量/理论载药量*100% 。2.4 PLGA载辛伐他汀微球中药物的释放分别取干燥的PLGA7525载辛伐他汀微球(表2,6号)、PLGA5050载辛伐他汀微球(表2,3号)及空白微球PLGA7525(表1,2号)、PLGA5050(表1,4号)粉末各0.015g,用5ml等张磷酸盐缓冲液(pH7.4)分散,37℃水浴;于1,3,5,7天,2-8周,分别取3ml上清液,用新鲜磷酸盐缓冲液3ml补足原液;紫外-可见光光度计Lambda800检测各试样于238nm处的吸收值,通过标准曲线方程求出各试液中辛伐他汀浓度,计算出累积释放量,确定各组载药微球的辛伐他汀释放曲线。通过标准曲线方程,溶液中辛伐他汀的浓度(C)的计算方程式为C=(A-0.02918)/0.01096(10-6g/ml),A为各时间点测得的被检测溶液的紫外吸收值。3. 结果3.1 PLGA空白微球的特点 PLGA可制备成不同粒径的微球,微球为圆形,表面光滑,大小不一(图1B、C)。平均粒径范围从358nm到1768nm,可满足制备不同降解速率载药微球的需要。空白微球的粒径随分子量的增加而递减(表1),这为后面制备不同粒径及药物释放速率的载辛伐他汀微球提供了载体材料的选择依据。表1 PLGA空白微球特点Tab1 Characteristics of empty PLGA microspheres编号聚合物、分子量 聚合物量(g)平均粒径(nm)1PLGA7525,1w0.217682PLGA7525,2w0.212583PLGA5050,1w0.28694PLGA5050,2w0.2358从表1中可以看出,应用PLGA制备的空白微球的粒径随分子量的增加而递减,粒径范围较宽,所制备的载药微球的药物释放速率范围也应该较大。以PLGA制备的微球,为较规则的圆形,表面光滑,粒径不同,这恰好可以满足不同载药量、药物释放速率及释放周期的微球制备要求,所制备的载药微球在应用中可保持药物持续、长效释放。CABAB图1 光镜下辛伐他汀在去离子水中的形态(50X)(A)、PLGA5050 空白微球的光镜照片(50X)(B)和SEM照片(C)Fig 1 Sim dispersed in H2O(50X)、PLGA5050 empty microspheres under optical microscope (50X)(B) and SEM(C)3.2 PLGA载辛伐他汀微球的特点光镜下,以PLGA制备的载辛伐他汀微球为圆形,表面光滑,大小不一(图2A、B)。平均粒径范围从213nm到8430nm,微球的详细参数见表2。因辛伐他汀不溶于水,将其超声处理后可在去离子水中表现为分散的晶体形态,不规则分布,无载药微球的规则形态,而且微球制备过程中的液相中也未见类似的晶体形态结构(图1A),可在一定程度上说明辛伐他汀已被包入聚合物微球中。SEM观察,微球表面形态均为球形,粒径大小不一,表面光滑、圆整,无粘连;有的微球表面可见有微孔(图2B)。表2 PLGA载辛伐他汀微球的特点Tab 2 Characteristics of PLGA microspheres loaded-Sim编号PVA溶液(ml)二氯甲烷(ml)聚合物聚合物:辛伐他汀微球平均粒径(nm)载药量(%)包封率(%)1151.5PLGA505010:184300.9910.972151.5PLGA50505:119302.4817.333151.5PLGA50503:12133.6218.094303PLGA752510:132232.5530.565303PLGA75255:114007.0535.276303PLGA75253:139110.1740.673.3 PLGA载辛伐他汀微球释放辛伐他汀的检测结果在37℃水浴,pH7.4 PBS环境中,辛伐他汀释放曲线显示,微球中辛伐他汀的释放特点接近零级释放动力学特征,说明所制备的载辛伐他汀微球具有缓释性,释放时间达8周以上。PLGA载辛伐他汀缓释微球的辛伐他汀释放速率可通过选择不同聚合比例的PLGA来调节。PLGA7525载辛伐他汀微球的辛伐他汀释放特点如图2C所示,辛伐他汀从微球中释放的速率较平缓,表现为3相释放,具有显示药物缓释的平台期。CBA 图2 PLGA7525,聚合物/辛伐他汀=3:1,载辛伐他汀微球光镜(A)( 100X)、SEM照片(B)和辛伐他汀释放曲线(C)Fig2 PLGA microspheres loaded-Sim (PLGA7525,polymer/Sim=3:1) under optical microscope(100X)(A)、SEM(B) and release curve of Sim(C)4. 讨论辛伐他汀等他汀类药物,属于羟甲基戊二酰辅酶A(HMG -COA)还原酶的抑制剂,常温下为白色粉末,难溶于水,易溶于有机溶剂。临床上已被广泛应用于降低血胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)。近年来研究发现,以辛伐他汀为主的他汀类药物可促进成骨细胞的增殖,促进骨组织形成。辛伐他汀可激活BMP-2启动子,可靶向选择性地作用于骨组织,对骨质疏松有治疗效果[1],并且对骨形成和骨矿化有积极作用,而且可降低发生骨折的风险,另有研究发现,辛伐他汀可抑制骨丧失,促进皮质骨形成,细胞学研究发现,辛伐他汀可促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,抑制向脂肪细胞分化。动物体内实验证实,辛伐他汀可加速局部骨缺损的修复[5],进一步研究发现辛伐他汀具有诱发调控血管形成、成骨细胞分化和骨形成的相关生长因子VEGF、BMP-2、Cbfa1早期表达的作用[6]。辛伐他汀还具有抑制破骨细胞性骨吸收的作用[7]及增强巨噬细胞免疫功能、抑菌效应[8]等。本研究即应用辛伐他汀的促进骨形成、抑制骨吸收及炎症反应的积极作用,将其制备成适合应用的成骨材料。但是辛伐他汀在应用时还有嗜肝性,肌毒性[9],特别是在较大剂量、长期服用的情况下,其毒、副作用较大;而且多次用药患者的顺应性较差,加之价格较昂贵,临床应用中患者的经济负担较重。因此,研制具有缓释、控释效果以提高生物利用度的载辛伐他汀缓释制剂,将具有潜在的应用前景。缓释、控释药物剂型具有可改变药物溶出速度,维持稳定的血药浓度;抗氧化、提高功能药物的稳定性,减少破坏;消除不良气味;促进功能药物的固位,减少挥发性成分的流失;减少药物用量,降低对机体的刺激等优点。这也正是本研究所预期制备的载辛伐他汀缓释、控释制剂的目标。PLA及其共聚物是一类合成可生物降解性高分子材料,无毒、无刺激性,不溶于水,溶于有机溶剂。具有优良的生物相容性、骨传导性,强度高,可塑性好,易加工成型。在生物体内经过酶分解,产物进入三羧酸循环,最终形成二氧化碳和水,经肺、肾、皮肤排泄,不污染环境,被认为是最有发展前景的可生物降解高分子材料,并作为载体材料已应用于部分亲水性、疏水性及大分子药物适用剂型的制备。PLA和PLGA是FDA批准的体内可生物降解材料,并已有一些相应产品上市。聚合物微球是指直径在纳米级至微米级,形状为球形或其他几何体的高分子材料或高分子复合材料。本研究拟制备PLGA载辛伐他汀缓释微球,以期达到有效发挥辛伐他汀促进成骨的积极作用,并减少用药次数、用药总量,从而达到有效降低消耗,控制毒、副作用的预期效果。本研究首先利用不同分子量和聚合比例的PLGA分别制备空白微球。实验发现,微球为球形,粒径大小不一,表面光滑、圆整,无粘连。随着载体材料分子量的增加,微球粒径有减小趋势,这可能是由于分子链较长的情况下更易于成球,而且更紧密的缘故[10]。聚合物比例不同、分子质量不同,降解速率也不同。如丙交酯与乙交酯摩尔比为75:25 的共聚物的降解周期为1个月,而摩尔比为85:15的共聚物需3个月完全降解,微球的降解速率与粒径呈负相关关系[11],这为本研究进一步制备不同粒径、药物释放速率的聚合物载辛伐他汀微球奠定了前期基础。根据PLGA空白微球的制备经验制备了不同粒径和载药量的PLGA载辛伐他汀微球。光镜下,微粒为规则的球形,粒径大小不一,表面光滑、圆整,无粘连;SEM下观察,微球表面光滑、圆整,有的微球表面可见有微孔。由于聚合物的降解释放药物需要一定时间,因此这些微孔的存在,可在微球尚未降解前,通过这些微孔首先扩散释放部分药物,发挥药效。随着载体材料分子量的增加,微球粒径减小,这与空白微球的表现规律相同。随着辛伐他汀与载体材料用量比例的增加,载辛伐他汀微球的粒径减小,包封率增高,这可能是由于辛伐他汀分子单元的增加而形成了更多的微球,辛伐他汀得到有效地包封,流失到水相中的更少有关。PLGA载辛伐他汀微球的体外释放曲线显示,辛伐他汀具有3相释放特征,包括扩散,微球降解以及控制扩散阶段。I相释放起始于未被PLGA包封的基质间隙、微孔的药物扩散释放;随着PLGA的降解,被包封的辛伐他汀逐步释放出来,这同时伴随着基质间隙、新的微孔的药物扩散释放,既Ⅱ、Ⅲ相是合并出现的,文献报道的载药微球释放特征也存在这样的情况[12]。微球在降解释放辛伐他汀药物后,体积逐渐变小,所占据的空间逐渐变小,这也是与组织修复要求相应增大的空间相互协调的,这正是本研究选择可生物降解性载体材料的目的所在,既保护和调控释放功能药物,又具有一定的传导性成骨作用,在完成其作用后又适时地消失,不留任何残骸;可根据组织修复及操作需要随意与其他材料(包括支架)、溶剂、赋形剂等预先复合加工制成不同释放速率、释药周期的微球基本单元及进一步方便应用的剂型,适用范围广泛。参考文献[1] Tanigo T, Takaoka R, Tabata Y. 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