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匡建民

匡建民

主任医师 教授
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DC/CIK/NK生物免疫治疗专栏

《生物制剂BRM的研制及对恶性肿瘤生物治疗的研究》荣获山东中医药科学技术二等奖(Z2007-2-4-1)——治疗肿瘤第四种模式“生物治疗”

发表者:匡建民 5897人已读

    恶性肿瘤疾病(又称癌症)是一组严重危害人民健康的疾病。在我国,肿瘤已成为继心脑血管疾病后的第二大疾病;全国人口死亡原因中,肿瘤排第一位,其次为心脑血管疾病。而今“手术、放疗与化疗”三大疗法为肿瘤患者所作的巨大努力仍不能解决“全球肿瘤发病率与死亡率均呈上升趋势”的严峻挑战,并且不能从根本上解决肿瘤的复发和转移的问题。因此,开发新一代肿瘤治疗方法显得迫切而重要。山东省肿瘤医院中西医结合科匡建民

       生物技术与免疫学的迅猛发展,从90年代初生物治疗开创起,已快速发展为以细胞因子、被动性细胞免疫(LAK,TIL,CIK)、主动性细胞免疫(DCs)、单克隆抗体、基因治疗为代表的多种特色治疗方法。

      肿瘤的生物治疗尤其是以DC为代表的系列技术,可以很好的控制癌症患者的转移和复发。2000年美国 “国际肿瘤生物/免疫治疗及基因治疗”年会会议的总结报告中这样写到:“生物治疗是目前知道的一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段之一,21世纪是肿瘤免疫治疗的时代”。

    专家预测:以常规治疗(手术,放疗,化疗)辅以肿瘤免疫治疗的综合疗法,将成为21世纪人类征服癌症的主要工具。

      生物制剂BRM的研制及对恶性肿瘤生物治疗的研究     

                                   目 

一、工作总结报告······················································································2

二、中文摘要·····························································································4

三、英文摘要······················································································6

四、课题研究内容·················································································9

1、BRM的制备工艺···························································································9

2、药品质量标准···················································································10

3、动物实验·························································································· 14

4、临床研究···························································································20

五、创新点与意义·················································································24

六、结论································································································28

主要参考文献··································································29

八、与该课题相关的研究································································31

九、附图·······························································································32

十、附件·······························································································34

1、临床使用证明··················································································34

2、查新报告···························································································35

              第一部分   工作总结报告

   “生物制剂BRM的研制及对恶性肿瘤生物治疗的研究”课题经过课题组近五年的努力于2001年1月在山东省动物实验中心进行动物实验,同时开展临床观察,在山东省肿瘤医院等医疗机构观察病人200例。课题组充分发挥中药与现代生物医学相结合的作用。在肿瘤凋亡阻止逃逸及提高肿瘤病人免疫力方面进行了一系列的实验与临床研究,本课题适应于各种癌存患者,并研究了生物制剂博得克中西医结合的配方,制作工艺流程,动物体内抗肿瘤活性的试验,抗癌活性的临床研究。研究中,对癌症的成因、分布、治疗机理、治疗方案做了深入细致的分析。查阅国内外大量国内外文献资料,剖析千余经验方,筛选上百种中药,遵循扶正培本、清热解毒与抗肿瘤相结合,合理配方,取得明显效果。

      课题研究结果表明:

    1.动物实验表明:BRM具有直接破坏肿瘤细胞的作用, 博得克有效调动了机体的非特异和特异免疫系统的反应,增强了对肿瘤细胞杀伤能力,实验证明,环磷酰胺与博得克联合给药对抑制肿瘤生长有减毒增效作用。

    2.治疗组腹水瘤细胞膜上有BRM的芽生体和病毒的颗粒;间接荧光抗体法观察到腹水瘤细胞表面具有较强的荧光显示。治疗肿瘤是改变或增强肿瘤的抗原性,进入带瘤小鼠体内能迅速吸咐,在细胞内生物合成,诱发并增强了肿瘤细胞抗原性,形成了较强的肿瘤相关抗原,从而刺激体内的免疫系统对增强了的肿瘤抗原进行免疫反应,杀伤肿瘤细胞,达到免疫治疗的目的。

    3.临床应用:临床研究证实常规化疗配合BRM治疗恶性肿瘤患者生活质量明显提高。kanofsky计分与治疗前相比平均提高30多分,癌症患者生存率明显提高,患者免疫力明显好转,病人生活质量得到明显改善,未见明显毒副作用。还具有减轻化疗的胃肠道反应及骨髓抑制的作用。证实该药可减毒增效,提高机体免疫力。

    本研究中生物制剂BRM的配方及制作工艺流程是首创的,其抗肿瘤给药途径是较独特的,实验研究方法、技术水准和观察指标在中医药研究领域属国内领先水平,研究成果具有极高的临床价值,经国内外广大患者的初步应用,治疗500余例患者,疗效明显,深受好评。其成果并进一步揭示了中医药治疗白血病的机理,丰富了中医药的研究内容。课题研究过程中,山东医学科学院科研处,山东省肿瘤防治研究院,山东省医学科学院附属医院,山东省动物实验中心在技术、资金、实验条件等各方面给予了大力支持和帮助,对此表示衷心感谢。              

        第二部分   课题摘要

    肿瘤细胞生物学的发展确立了大量与肿瘤发生发展密切关联的关键分子,成为治疗肿瘤的分子靶点,针对其研制调控基因特异性拮抗剂成为药物研发趋势。本研究中生物制剂(BRM)是一种生物反应调节剂(Biological Response Modifider-BRM)能够诱导机体产生内源性干扰素(Interferon,IFN),增强巨噬细胞的吞噬功能,调节T、B淋巴细胞,激活特异性和非特异性免疫功能,最终实现对肿瘤、病毒感染及其它免疫性疾病的生物免疫治疗。

      1.主要成分

     BRM主要有金银花20g、黄芩20g、野菊花20g等,蒸馏水500ml,鸡胚尿液400ml组成。应用特定的生物因子种植于鸡胚尿液培养基中无菌隔离培养,经系列工艺处理形成经鼻粘膜吸收的水剂药物。

     2.BRM动物实验

   说明具有直接破坏肿瘤细胞的作用,单用对小鼠S180腹水瘤有明显的治疗效果,对实体瘤荷瘤小鼠具有明显的抑制肿瘤的作用。如联合CTX可提高疗效,增强了对肿瘤细胞杀伤能力。实验证明,环磷酰胺与博得克联合给药对抑制肿瘤生长有减毒增效作用。可改变或增强肿瘤的抗原性,进入带瘤小鼠体内能迅速吸附,在细胞内生物合成,诱发并增强了肿瘤细胞抗原性,形成了较强的肿瘤相关抗原,从而刺激体内的免疫系统对增强了的肿瘤抗原进行免疫反应,杀伤肿瘤细胞,达到免疫治疗的目的.

     3 临床研究:

    临床研究证实常规化疗配合治疗恶性肿瘤患者生活质量明显提高kanofsky计分与治疗前相比平均提高30多分,癌症患者生存率明显提高,患者免疫力明显好转,病人生活质量得到明显改善,未见明显毒副作用。还具有减轻化疗的胃肠道反应及骨髓抑制的作用。证实该药可减毒增效,提高机体免疫力。

     4.中药方剂经独特工艺处理形成经鼻粘膜吸收的水剂药物,具有“直接破坏肿瘤细胞、刺激体内的免疫系统对肿瘤抗原进行较强的免疫反应,杀伤肿瘤细胞,达到免疫治疗的目的”作用。本药属中药制剂,为中药与灭活病毒联合体,成本低,便于临床大面积推广,可广泛应用于家庭病床,符合低成本医疗卫生发展方向。预计每年可创效益约计200万元。

         第三部分  英文摘要                             Abstract

     Based on the development of tumor cytobiolopecifiny key molecules connecting intimately with tumorigenesis and growth have been developed and have become the tumor therapy targets. Developing specific antigens to controlling gene has become the tendency of medicine investigation. In this research, the Biologicals-BRM is a kind of Biological Response Modifier (BRM), which can induce the Interferon (IFN) in the body, strengthen the function of the macrophage, adjust the achroacyte of T and B, activate the specific and non-specific immunity, and at last realize the biological immunity cure of the tumor, virus infection and other immunity diseases.         

     1 . BRM is mainly composed of radices isatidis seu baphicacanthi (20g), flos lonicerae (20g), radices scutellariae (20g), Matricaria indica(20g)(extracting liquid supernatant500ml), distilled water(500ml), chick embryo’s urine(400ml). Specific biological factors are implanted in chick embryo’s urine to carry out asepsis culture and series of artwork disposal are performed to purify. That is how BRM produced . It is absorbed through nasal mucosa.

  2.BRM animal experiment

  (1) The experiment indicates that BRM has the function of destroying the tumor cell. For example, CTX can improve the curative effect, effectively arouse the organism’s specific and non-specific immunity system, and strengthen the effect of killing the tumor cell. Experiment shows that cyclophosphamide and BRM used together have the growing effect of repressing the growth of the tumor cell.

   (2) When BRM enters the tumor mouse, it can quickly absorb and infect the tumor cell, induce and strengthen the antigenicity of the tumor cell, form the stronger corresponding tumor antigen, so it can stimulate the immunity system in the human body, form immunity response according to the stronger tumor antigen, kill the tumor cell, and achieve the purpose of being immune.

    3 clinical research:   only using the BRM to cure therioma, the patient’s living quality improves apparently. The score rise 30 in Kanofsky’s marking compared with the condition before the cure. The living period extend 25 days averagely. It has no side effect compared with the only use of chemical therapy. BRM with chemical therapy, compared with the only use of chemical therapy, have the effect of relief the response of gastrointestinal tract and repress the bone marrow. So it proves that the medicine can reduce toxin and improve the human body’s immunity.

   4 BRM uses the special Chinese traditional medicine and forms through series of artwork disposal. It is absorbed through nasal mucosa. It has the effect of “directly destroying the tumor cell, stimulating the organism’s immunity system to response to the tumor antigen, killing the tumor cell, and achieving the purpose of being immunity and curing”. This medicine is Chinese traditional medicine pharmaceutics, which is a union of Chinese traditional medicine and inactivated virus. Its cost is low, and it is easy to be used clinically and can be widely applied in house hospital. It corresponds with medical treatment’s developing schedule of low cost and wide use. It has the potential benefits of 2million yuan each year.

        第四部分   课题主要研究内容

    本研究中生物制剂(BRM)是一种生物反应调节剂(Biological Response Modifider-BRM),具有直接破坏肿瘤细胞的作用,并能够诱导机体产生内源性干扰素(Interferon,IFN),增强巨噬细胞的吞噬功能,调节T、B淋巴细胞,激活特异性和非特异性免疫功能,最终实现对肿瘤的生物免疫治疗。现完成了全部研究工作,分别报告如下:

      一   制备工艺

    主要由板蓝根20g、金银花20g、黄芩20g、野菊花20g,蒸馏水500ml,鸡胚尿液400ml组成。板蓝根、黄芩等中药加水2000ml煎煮1.5小时滤过备用,再加入2000ml水同法煎煮1小时滤过与第一次煎液合并浓缩至500ml,加3倍无水乙醇沉淀72小时,取上清液回收乙醇,加蒸馏水稀释至1000ml过滤为澄清液,灭菌后加入40%鸡胚尿液无菌分装即得。 取孵育9至10天的鸡胚以无菌操作抽取尿囊腔中尿液,置无菌瓶中,即可按比例与中药复合液混合、分装、封口、-20℃保存。药物稳定性试验证明本品保存在—20℃,18个月仍不变质及无菌状态。使用方法:每次0.5ml滴鼻,每日2次,连续使用30天。药物通过鼻肺粘膜吸收和呼吸进人血液交换,达到提高患者免疫力,增加免疫细胞的吞噬能力,或直接杀伤肿瘤细胞,达到抑制肿瘤细胞生长的目的。板蓝根,性寒,味苦,功能主治:清热解毒,凉血利咽。金银花是清热解毒功效显著的名贵中药材。性味甘、寒,入肺、胃、心经,主要用于热毒疮痈,具有解毒散痈,清热凉血功效,还可以清肿明目、疏风散寒,用于各种热性病。黄芩,性寒,味苦。功能主治:消热燥湿,泻火解毒,止血,安胎。野菊花功效:疏风清热、解毒消肿、疏肝破血。以上四味中药经药理学研究证实具有抗病毒、抗感染、抗肿瘤作用。以特种灭活病毒与鸡胚尿液相结合佐以黄芩等中药清热解毒、扶正培本制成的博得克。经过一系列动物实验,并在动物实验的基础上,经过数百例患者的临床应用,证明该药物的疗效是显著的,为最终攻克癌症奠定了一定的理论和实践基础。

           二   质量标准

    BRM应用特定的生物因子种植于鸡胚尿液培养基中无菌隔离培养,经系列工艺处理形成经鼻粘膜吸收的水剂生物药物,为保证产品质量,特制定本质量标准,本标准主要根据产品的自身特点而确定。关于标准中的实验方法,是按卫生部1999年12月颁布的《消毒技术规范》中的规定方法检验。该产品已获得山东省消准字批准文号。

     1、范围:

    本标准规定了BRM的制备方法、检验方法、检验规则、标志、标签、使用说明书、包装、运输及贮存。

本标准适用于以板蓝根、金银花、黄芩、野菊花等复合提取液加入适量鸡胚尿液制成的一种具有杀菌、抑制病毒和调节免疫功能的制剂。

    2、引用标准

   下列标准新包含的条文,通过在本标准中的引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均有效。所有标准都可以被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

2.1 GB15979—1995《一次性使用卫生用品卫生标准》

2.2 GB15981—1995《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》

2.3《消毒技术规范》《实验技术规范》卫生部1999年11月

2.4《中药大辞典》

3、技术要求

3.1感官指标

微黄,透明或半透明,无味的液体。

3.2理化指标

3.2.1含板蓝根、黄芩等有效成份≥60%。

3.2.2   PH值    7±

3.3  消毒杀菌指标

板蓝根、黄芩等都具有抗病毒和强力杀菌作用,主要杀灭葡萄球菌,大肠杆菌。

   4、试验方法

4.1感观指标

采用目测检查

4.2 板蓝根、金银花、黄芩、野菊花有效含量≥60%,按《消毒技术规范》中的有关方法检测。

4.3  PH值测定

用PH试纸检测PH   7±

4.4消毒灭菌指标检验

按卫生部颁布的《消毒技术规范》中的规定方法检验。

   5、检验规则

5.1出厂检验

5.1.1每批制品须经本单位质量检验部门进行检验,合格后并附有合格证方可出厂。

5.1.2出厂检验项目为:感观指标,有效药物含量,PH值。

5.1.3每批最少抽取1ml/支,共100支,按出厂检验项目进行检验。

5.2型式检验

5.2.1有下列情况之一时,应进行型式检验:

a新产品投产前(包括老产品转厂生产);

b连续生产中,每年不少于两次;

c间隔一个月再投产时;

d每一批原料制成的产品;

e在设计工艺有重大改动时;

f质量监督部六对产品质量进行监督时。

5.2.2 型式检验项目

要求中的全部项目

5.2.3抽样及判定

每批产品中,随机抽取100ml进行逐项检验,在检验结果中,若有一项指标不合格,应加倍抽样进行复检,若仍不合格,则判该批产品不合格。

6、标志、标签、使用说明书

6.1标志、标签

6.1.1内包装应有下列标志:

a制造厂名称、地址、注册商标、产品标准编号、批准文号;

b产品名称、有效期;

c净质量;

d产品介绍、注意事项、使用方法。

6.1.2外包装应有下列标志。

a制造厂名称、地址、注册商标、产品标准编号、批准文号;

b产品名称、有效期;

c毛重和数量;

d小心轻放、防潮、防雨、防晒、冰冻贮存。

6.2使用说明书

使用说明书应注明以下内容:

a制造厂名称、地址、注册商标;

b产品名称;

c产品特点、使用要求、主要参数。

   7、包装、运输、贮存

7.1内包装采用1ml塑料滴瓶包装,外包装采用塑料盒包装。

7.2运输

大量长途运输需用有冰柜装置的车,路途近可用沫塑料盒,内装有冰块运输。

7.3贮存存于—20℃至—40℃冰柜或冰室内贮存。

7.4保质期在规定的条件下,产品自出厂之日起,保质期为12个月。

       动物实验

1抗癌活性的实验研究(动物体内抗肿瘤活性):

1.1药品和材料:BRM滴鼻液、碘酊、酒精、2ml无菌空针。肝素。0.2%台盼蓝生理盐水溶液。环磷酰胺(为江苏恒瑞医药股份有限公司产品, 批号05122521)。2.5%戊二醛溶液。

1.2实验器材:扭力天平

1.3实验瘤株:肉瘤S180种鼠引自山东省医学科学院药物所。

1.4实验动物:健康昆明种小白鼠购于山东省防疫站实验动物中心,雌雄各半,5-6周龄,体重18-22g。

1.5小鼠肉瘤和腹水瘤模型的制备及接种

选择腹腔接种肉瘤S180后8日健康较好的种鼠,将抽出的腹水细胞数调整至每毫升4×107个活细胞接种小鼠腹腔(腹水瘤)或腋下(实体瘤)一次性注射0.2ml。

1.6BRM滴鼻液对小鼠S180腹水瘤生长的影响

将腹水瘤或实体瘤小鼠随机分为8组,每组20只,雌雄各半,分笼饲养。于接种次日开始,第一组未治疗作为对照组,第二组为治疗组,给博得克滴鼻液每次每鼠0.5ml灌胃,每日三次,疗程为40天。于治疗后次日称体重,逐日记录,自接瘤之日起,记录生存天数,观察小鼠存活率。其它三组对照组单用环磷酰胺(Cy)其剂量分别为50mg,100mg,200mg,对照组在其基础上加用博得克每次每鼠0.4ml灌胃,每日3次。观察其生存率。

1.7疗效评价:

1.71 腹水型肿瘤疗效评价以生命延长率表示。生命延长率%=(T/C-1)×100%。T是治疗组平均生存天数,C是对照组平均生存天数。

1.72 实体瘤组:与荷瘤接种后14日处死动物,先称体重,后解剖皮下瘤块,称重。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示:瘤重抑制率%=(1-T/C)×100%。;T是治疗组平均瘤重,C是对照组平均瘤重。

1.8结果---治疗小白鼠腹水瘤的实验

1.8.1治疗小鼠S180腹水瘤结果:

 

平均死亡天数

存活率

对照组

17.4 ±2.1

20.6

治疗组

 

32.1±2.4*

64.1*

采用X²检验法,结果治疗组均明显高于对照组(*p<0.01)。

其结果显示:BRM对小鼠S180腹水瘤有明显的治疗效果。其平均生命延长率84.5%,存活率为64.1%,均明显提高。具有统计学意义。1.8.2“BRM滴鼻液”对实体瘤荷瘤小鼠组的抑瘤率结果

 

治疗组

对照组

实体瘤重X±S

0.575±0.38*

1.45±0.28

抑瘤率%

46.0*

-10.6

结果治疗组均明显高于对照组(*p<0.01)

以上实验表明:BRM滴鼻液对实体瘤荷瘤小鼠具有明显的抑制肿瘤的作用。实体瘤明显缩小。

1.8.3三种环磷酰胺(Cy)剂量与BRM(V)(给药剂量如前)联合治疗S180的实验结果:

给药

生存率

生存率

Cy剂量

Cy

V+Cy

50

31.7

69.4*

100

68.1

78.1*

150

69.5

78.4*

从上结果看BRM联合环磷酰胺治疗小鼠生存率明显高于单用环磷酰胺(*P<0.01,且环磷酰胺100mg时配合BRM每次每鼠0.5ml灌胃每日3次,其生存率78.1%,加量环磷酰胺其生存率无明显提高(P>0.05)。

2免疫实验

2.1动物 18~22g健康雄性ICR小鼠,每个试验项目40只。

2.2 仪器与试剂 

BRM滴鼻液,其它试剂为通用药理试验试剂。动物天平、分析天平、洁净工作台、离心机、恒温水浴、酶标仪、显微镜、无菌手术器械、游标卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(25μl)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96 孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200 目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片、绵羊红细胞(SRBC) 、0.9%生理盐水、Hank’s液(pH=7.12~7.14) 、RPMI1640 培养液、小牛血清、刀豆蛋白A(ConA)、1%冰醋酸、1mol/L 的HCl 溶液、酸性异丙醇(96ml 异丙醇加4ml剂量为1mol/L的HCl溶液) 、MTT、PBS缓冲液(pH=712~714)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、YAC - 1细胞、乳酸钠、氧化型辅酶I、012mol/LTris - HCl缓冲液(pH8.12)、1%NP40、印度墨汁、011%Na2CO3 、Giemsa 染液等。

2.3实验方法

2.3.1二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)

将小鼠按体重随机分入33.3、333.3和1000mg/kgb.w.3个剂量组和1个对照组,每组10只。样品用双蒸水配制,每日经口灌胃,灌胃容积为20mL/kgb.w.,对照组灌双蒸水。15d后,小鼠腹部去毛,1%二硝基氟苯(DNFB)丙酮麻油溶液50μL涂抹致敏。致敏后5d,小鼠右耳均匀涂抹1%DNFB丙酮麻油溶液10μL进行攻击,左耳涂抹丙酮麻油溶液作对照,攻击后24h处死小鼠,剪下左右耳壳,于同一部位取直径8mm的耳片称重,左右耳片重量之差作为肿胀度。同时取小鼠的胸腺及脾脏,以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作为脾脏/体重比值和胸腺/体重比值。

2.3.2血清溶血素测定(半数溶血值(HC50)测定法)

动物分组和剂量和处理同DTH试验。连续灌胃15d后每鼠腹腔注射2%(v/v)压积SRBC0.2mL致敏。免疫5天后,小鼠摘眼球采血,取血清溶血反应,另设不加血清(以SA缓冲液代替)的对照管为比色空白,于540nm分别测定各管光密度值。按下式计算各鼠的样品HC50:

样品HC50=样品光密度值SRBC半数溶血时的光密度值×200

2.3.3BRM滴鼻液诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT)法

动物分组和给药方法同前。给药15天后,无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’s 液洗3次,每次离心10min(1000rpm) 。然后将细胞悬于2ml 的完全培养液中,计数活细胞数,调整细胞浓度为2×106 个/ml 。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中, 每孔1ml , 在其中一孔加50ulConA液(相当于5ug/ml),,另一孔作为对照,置5%CO2 ,37℃培养72h。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.17ml,,加入0.17ml 不含小牛血清的RPMI1640 培养液,同时加入MTT(5mg/ ml) 50μl/ 孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔酶标板中,每个孔分装3个平行孔,在酶标仪上以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增值能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA 孔的光密度值表示。

2.3.4 NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)

动物分组和给药方法同前。给药20天后取小鼠脾脏,制成5×106个/ml的细胞悬液,取100µl脾细胞悬液与100µl的YAC-1细胞悬液(1×106个/ml)混合于96孔板内,置37℃温箱孵育4小时后,取上清液100µl加入另一培养板并与LDH基质液(100µl)反应3分钟,加入30µl盐酸(1mmol/L)显色,并用酶标仪(波长492nm处)测定光密度并计算NK细胞活性。

 2.4结果---治疗小鼠H22 腹水瘤观察

 

对照组

实验组

淋巴细胞转化(%)

18.0±5.2

40.5±4.9*

NK细胞活性(OD)

0.0105±0.0052

0.0375±0.008*

PEC(OD)

0.386±0.121

0.566±0.092

Ea花环(%)

25.25±4.2

30.91±3.6

巨噬细胞吞噬率

32.8±4.3

94±3.1*

吞噬指数

0.84±0.09

3.72±0.31*

实验组与对照组:*P<0.01。

2.5动物实验结论

2.5.1以上实验说明BRM具有直接破坏肿瘤细胞的作用,单用博得克对小鼠S180腹水瘤有明显的治疗效果,对实体瘤荷瘤小鼠具有明显的抑制肿瘤的作用。如联合CTX可提高疗效,增强了对肿瘤细胞杀伤能力。实验证明,环磷酰胺与BRM联合给药对抑制肿瘤生长有减毒增效作用。

2.5.2治疗组腹水瘤细胞膜上有BRM的芽生体和病毒的颗粒; 间接荧光抗体法观察到腹水瘤细胞表面具有较强的荧光显示.BRM治疗肿瘤是改变或增强肿瘤的抗原性,进入带瘤小鼠体内能迅速吸咐,在细胞内生物合成,诱发并增强了肿瘤细胞抗原性,形成了较强的肿瘤相关抗原,从而刺激体内的免疫系统对增强了的肿瘤抗原进行免疫反应,杀伤肿瘤细胞,达到免疫治疗的目的.

3毒理学安全性及过敏反映评价:

在动物实验过程中及临床观察均未见急性毒性实验及过敏试验。

  抗癌活性的临床研究

一病例收集

1纳入标准:

   1.1.全部病例为门诊或住院病例,均经组织学或细胞学诊断明确的恶性肿瘤。全部病人200例按1:1随机分为实验组和对照组。治疗组100例,男53例,女47例。年龄16岁一86岁,平均年龄为63.2岁。初治30例、复治70例。肺癌8例,胃癌25例、大肠癌16例、食管癌19例、肝癌8例、乳腺癌5例、鼻咽癌3例、唇癌1例、卵巢癌9例、子宫癌3例、胰腺癌1例、膀胱癌2例。对照组100例,男48例,女52例。年龄17岁一82岁,平均年龄为65.1岁。初治28例、复治72例。肺癌10例,胃癌21例、大肠癌17例、食管癌20例、肝癌6例、卵巢癌7例、直肠癌7例、乳腺癌4例、子宫癌2例、胰腺癌1例、膀胱癌2例、鼻咽癌1例、甲状腺癌1例、慢性粒细胞白血病1例。两组性别、年龄、病种经统计学检验无意义(P>0.05)。

2排除标准:

    1.晚期患者或预期生存期少于6个月者;

    2.合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病;

    3.孕妇、儿童和精神病患者;

3剔除标准:

 资料不全患者。

    二给药方法

1实验组在常规治疗的基础上给予BRM滴鼻液每人(成人) 第1-5天每次0.5ml,每天一次,第六天起每次1ml滴鼻,连用30天。连用2~4个疗程。

2对照组在常规治疗的基础上同时应用0.9%生理盐水滴鼻。每日2次,连续使用25天为1疗程,连用2~4个疗程。

3疗程结束后进行评价。

三观察指标

1安全性观测

1.1一般体检项目

1.2血、尿、便常规检查

1.3心、肝、肾功能检查

2 疗效性观测

2.1肿瘤症状变化、生活质量状况(按Karnofsky评分为标准,在疗程前后均评分)。体重变化

2.2T淋巴细胞亚群变化

3 疗效评定

3.1客观疗效评定

客观疗效  按WHO1981年制定的实体瘤疗效评价标准分为:完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD),治愈为显效,CR+PR为有效、SD+PD为无效。

3.5、统计方法:有效率的比较用卡方检验

5.3疗效结果

 

对照组

治疗组

显效

33(16.5%)

47(23.5%)*

有效

68(34.0%)

99(49.5%)*

无效

99(49.5%)

54(27.0%)*

经统计学检验,对照组与治疗组*P<0.01。

按Karnofsky评分为标准,两组病例生存质量改善情况(%)

项目

对照组

治疗组

体重

35.37

41.58

食欲

10.05

29.01*

睡眠

4.39

39.5*

精神状况

15.68

29.68

日常活动

22.10

29.58

与人交往

16.24

40.26*

Karnofsky评分

33.62

69.98*

注:与对照组比较:*P<0.01

 T淋巴细胞亚群变化:

 

对照组

治疗组

NK

19.23±6.36

26.35±7.36*

CD3

58.41±6.26

70.56±7.63*

CD4

34.56±5.36

51.68±8.26*

CD8

32.15±6.32

33.86±7.30

CD4/CD8

1.07±0.26

1.53±0.29*

注:与对照组比较:*P<0.01。

博得克对肿瘤病人具有显著的疗效:提高患者生存率,能提高患者免疫力,明显改善病人生活质量,提高患者生存期,临床观察中未见明显副作用。

     第五部分 创新点及意义

主要创新点:

1.本研究中生物制剂BRM的研制及制作工艺是首创的。首创中药与灭活病毒联合体。完善了祖国医学与生物工程相结合的方法控制癌症的设想。填补了国内这方面研究的空白。

 2.其抗肿瘤的作用原理同国内研究的先进水平相同、治疗肿瘤为多靶点的抗肿瘤作用。其癌热致病的理论丰富了中医治疗肿瘤的理论。

3.实验研究方法、技术水准和观察指标在中医药研究领域属国内领先水平。

4.用药途径简单方便,副作用小。成本低,便于临床大面积推广,可广泛应用于家庭病床,符合低成本、覆盖广的医疗卫生发展方向。该制剂已获得山东省消准字批准文号。每年可创效益约计200万元。

      肿瘤作为一种常见病、多发病,严重损害着人们的健康。据统计全世界每年新发癌症患者800多万,死亡600多万。在我国,癌症的发病率和死亡率也在逐年上升。从70年代到90年代的20年中,我国癌症发病率由每年90万人上升到160万人,死亡数由每年70万人上升到130万人。当前癌症的治疗方式主要有以下几种:手术、放疗、化疗、生物免疫治疗、中医治疗。手术治疗:肿瘤常用的治疗方式,适合各期的肿瘤治疗,如术前化疗、术中化疗、术后化疗、化疗合并放疗、单纯化疗等。免疫治疗:肿瘤的辅助治疗方式。化疗是肿瘤治疗的最常用的治疗方法,且经过多年的研究取得了很大的成绩,但就目前研究的发展趋势来说,化疗仍有很多不如人意之处。 由于单一治疗方法有其局限性,不能达到更高的疗效。现在往往采取合理、有计划的综合治疗,且在相当多的肿瘤中取得较好的疗效。近几年来综合治疗已经取代传统的单一治疗方式,在许多的肿瘤中取得较高的治愈率。综合治疗的特点是取长补短,彼此协调,多管齐下,全面调理。目前研究显示通过中药治疗增强或调整机体抗病能力可在一定程度上提高治愈率,中药制剂主要通过机体免疫功能提高来改善机体自愈能力,同时增强机体抗放、化疗的毒副作用的能力,提高放、化疗的效能,增强机体的耐受能力,从而提高治愈率。中西医结合治疗肿瘤是中国防治肿瘤的特色之一。中医药学有几千年的历史,有丰富的临床经验,而且以古代哲学思想为理论基础去指导临床实践,形成了独特的医疗体系。随着中医药学的发展,在大量的中医药学书籍中记载着有关肿瘤的丰富内容。中国的医药学者不断运用现代科学和西医学去深入探索,取得不少成绩,积累了很多治疗经验,并在临床及基础实验研究中有所发展和有所创新。中医治疗肿瘤主要有四大法则,包括扶正培本法,活血化淤法,清热解毒法,软坚散结法。这些法则的运用往往需要相互结合。扶正培本不仅是扶助机体正气不足,还要协调阴阳气血之平衡,达到治疗的目的,扶正培本是当前中医治疗肿瘤的最大特色,临床与实验研究证明中药之所以能延缓肿瘤发展或抑制肿瘤,主要是通过提高机体的机能状况,如提高免疫机能,激活机体固有的抗癌因素的活性去控制或抑制肿瘤,而直接去杀死癌细胞的不多,或其杀伤(直接)作用于当前毒性化疗相差很远。热与毒的来源有很多,外邪直接侵犯体表,诸邪侵入,郁久化热;七情不舒,郁结成块等形成热邪。热邪郁久而化毒,热毒内蕴可形成肿瘤,烁热炼液,凝结成块。与此同时,肿瘤自身也可生热成毒,继而形成恶性循环。所以清热解毒法在治疗肿瘤中其重要的作用。这一点已得到公认,中医药学在肿瘤的综合治疗中占重要的地位。其成绩已被临床医生认可。中医治疗作为综合治疗的一部分,与手术治疗、放疗、化疗等同用,可以减轻放疗、化疗的不良反应,使患者较顺利地完成疗程。在手术治疗、放疗、化疗之后应用中药,可以提高远期疗效。对不适合手术治疗、放疗、化疗的患者,中药作为主要的治疗方法,可以控制肿瘤,同时改善症状和提高生存质量、尤其对某些终末期肿瘤患者,使用中药可以减轻症状,在一定程度上改善生存质量。 在充分的理论分析的基础上,用内因与外因相结合,祖国医学与生物工程相结合的方法控制癌症,最终攻克癌症便是一个大胆的、可行的设想。课题组成员对癌症的成因、分布,治疗机理,治疗方案做了深入细致的分析,查阅国内外各种大量文献资料 , 剖析千余有效治癌经验方,筛选百余种中药,遵循扶正培本、清热解毒与抗癌相结合,君臣佐使,合理配方。经过小白鼠动物实验 ,取得了大量相关数据。在动物实验的基础上,走访了带瘤生存了几十年的癌症患者,依照中医传统理论,结合现代科技手段及各位专家多年的临床实践,研制开发了治癌中药,设计并实践了中药与生物制剂结合的复合疗法。经过数百例患者的临床应用,证明该药物的疗效是显著的,为最终攻克癌症奠定了一定的理论和实践基础。

     BRM滴鼻液通过鼻肺粘膜吸收和呼吸进人血液交换 ,达到提高患者免疫力 ,增加细胞的吞噬能力,抵消化疗和放疗的副作用,达到抑制癌细胞生长的目的。动物实验证明种植癌肿的小白鼠食用该药后存活期延长了几倍。自2002年开始临床研究 ,治疗多种肿瘤均取得满意效果,可直接杀死癌细胞 ,而对正常细无任何损伤,并有效地启动人体免疫,抵消和减少化疗、放疗引起的白细胞减少等毒副作用,证明能明显抑制癌细胞的产生,并有杀伤肿瘤癌细胞、防止转移以及预防性治疗的作用。治疗病人上百例,取得了满意的临床效果。

     第六部分   结论

    课题研究结果表明:

    1.动物实验表明:BRM具有直接破坏肿瘤细胞的作用, 有效调动了机体的非特异和特异免疫系统的反应,增强了对肿瘤细胞杀伤能力,实验证明,环磷酰胺与BRM联合给药对抑制肿瘤生长有减毒增效作用。

    2.临床应用:临床研究证实常规化疗配合BRM治疗癌症,患者生活质量明显提高。kanofsky计分与治疗前相比平均提高30多分,癌症患者生存率明显提高,患者免疫力明显好转,病人生活质量得到明显改善,未见明显毒副作用。还具有减轻化疗的胃肠道反应及骨髓抑制的作用。证实该药可减毒增效,提高机体免疫力。

     本研究中生物制剂BRM的配方及制作工艺流程是首创的,其抗肿瘤给药途径是较独特的,实验研究方法、技术水准和观察指标在中医药研究领域属国际先进水平,研究成果具有极高的临床价值,经国内外广大患者的初步应用,治疗500余例患者,疗效明显,深受好评。其成果并进一步揭示了中医药治疗肿瘤的机理,丰富了中医药的研究内容。该研究成果体现了中医药防治肿瘤的主要方向:

1 延长生命,减轻痛苦,提高带瘤生存质量。

2 对放、化疗具有减毒增效作用,有利手术创伤的愈合。

3 减少肿瘤术后复发及转移的机会。

4该制剂成本低,工艺简单,用法独特,符合中国卫生发展方向:即低水平,广覆盖的医疗保障用药原则。

      第七部分  主要参考文献

1 马丁.周剑峰.肿瘤基因临床产品的国外现状及评论,中华肿癌杂志,2003.Vol25 No1:2

2 章静波.编译“关闭”癌细胞“疯长”的信号,健康报 2006.6

3 刘启才,李晓燕,韦拔雄.NP9基因抑制鼻咽癌细胞成癌的实验研究.中华肿癌杂志,2005.11:641-644

  4 陈丰,高红兰,宋俊标.ELF方案联合慈丹胶囊治疗晚期肿瘤64例临床分析 ,中国肿瘤杂志,2005.8:476—479

   5 Rhine K,Klein A,Munch Metal.Chromosomal region 15q21.1 is a frequent targent of allelic imbalance in advanced breast carcinomas IntJ Cancer 2003,106(1):74-77.

   6 Bulnn SE Takayama K,Sukuki T,etal. Organization of the

humanaromat ase p450(CYP19)gene.Semin Repron Med,2004,22(1)

:5-9

7 Bruegemeier RW ,Richards JA,Petrel TA.Aromatase and cyclooxygenases:enzymes in breast cancer. Steroid Biochem Mol Biol,2003,86(3-5):501-507

8杨迪生,苗旭东,叶招明.TRAIC增强低剂量阿霉素高效诱导人骨肉癌细胞凋亡的实验研究,中华肿瘤杂志,2005.9:573-577

9 HermannM,Scholmerich J,Straub RH.Influence of cytokines and growth factors on distinct enzymes in vitro:a shot tabular data collection ,Ann N Y Acad Sci,2002,966:166-186 10 Speirs V,Walton DS ,Hall MC,et al.In vivo and in vitro expression of steroid-converting enzymes in human breast with interleukin-6.BrJ Cancer,1999,81(4):690-695

11马凌娣,张彦,文世宏.苦参碱对带瘤小鼠抑瘤作用的实验研究  中国肿瘤杂志, 2005.6:339-342

12陆舜,虞永锋,李子国.肿癌分子靶向治疗进展,中华肿癌杂志,-7032005.11:701

     第八部分  与本课题相关的研究成果

(1)《BRM滴鼻法对肿瘤靶向调节的基础与临床研究》 中华医学论坛

(2)《生物制剂BRM的研制及对恶性肿瘤生物治疗的基础研究》  国际医学与生物学学术会议和首届中国中青年肿瘤医学专家论坛大会报告。

(3)中医药治疗消化道肿瘤的基础与临床研究  山东省教委三等奖

(4)《中西医结合肿瘤治疗康复指南》主编

(5)《现代乳腺肿瘤学》编委  山东省科委三等奖

(6) 中西医结合治疗原发性肝癌的序贯疗法  山东省医学会一等奖

(7) 论原发性肝癌的淤毒相关机制   山东省医学会  一等奖

(8) 瑞香抗癌方治疗肿瘤患者化疗后免疫功能低下30例  山东中医杂志编辑部   二等奖

                   第九部分  附图(略)

  图1:小白鼠动物实验对照组实体瘤 。    图2:动物治疗组实体瘤称重

  图3:实体瘤荷瘤小鼠实验组与对照组 。图4:实体瘤荷瘤小鼠实验组与对照组瘤体比较

  图5:动物实验对照组与治疗组对照。     图6:动物实验测量肿瘤长度

                 生物制剂BRM的研制及对恶性肿瘤生物治疗的研究   课题组组长  匡建民

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发表于:2010-07-01 19:57

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