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CD44v6、ICAM-1与E-cadherin在子宫内膜异位症中的表达及意义

发表者:颜林志 1855人已读

CD44v6、ICAM-1与E-cadherin在子宫内膜异位症中的表达及意义

 

【摘要】  目的:研究子宫内膜异位症(EM)患者在位和异位内膜粘附分子CD44拼构变异体6(CD44v6)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和细胞钙粘附素E(E-cadherin)表达及其在EM发病机制中的作用。方法:采用S-P免疫组化染色法对30例子宫内膜异位症患者的异位内膜、在位内膜与30例正常子宫内膜进行CD44v6、ICAM-1和E-cadherin检测。结果:. 异位内膜组CD44v6、ICAM-1表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),E-cadherin表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);.在位内膜组CD44v6、ICAM-1和E-cadherin表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CD44v6、ICAM-1、E-cadherin和子宫内膜异位症的发生发展密切相关。温州医科大学附属第二医院妇科颜林志

【关键词】  子宫内膜异位症;CD44v6;ICAM-1;E-cadherin

 

子宫内膜异位症(endometriosis,EM )是一种良性妇科疾病,但它的某些生物学行为却与恶性肿瘤类似,它所导致的痛经和不孕对女性身心的损害越来越引起人们的重视。EM的发病及异位内膜生长机制尚不十分清楚。许多研究证实,细胞粘附分子(Cell adhesion molecules,CAMs)家族在子宫内膜异位症中的异常表达可能与该病发生有关。本文采用S-P免疫组化染色法对子宫内膜异位症患者的异位内膜、在位内膜与正常子宫内膜进行了粘附分子CD44拼构变异体6(CD44v6)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和细胞钙粘附素E(E-cadherin)检测,以讨论其在子宫内膜异位症中的表达及意义。

1 材料与方法

1.1 临床资料  EM组为自2004年1月-2006年4月在我院因EM而行腹腔镜或开腹手术的30例患者,年龄24~50岁,平均(38.8±7.2)岁。对照组为同期经腹腔镜诊治术确诊为正常盆腔的30例患者,年龄27~50岁,平均(39.1±6.3)岁。所有病例均无其他内分泌、免疫和代谢性疾病,术前3个月内均未接受激素治疗,术后均经病理证实。

1.2 标本采集 在腹腔镜或开腹手术时取子宫内膜、巧克力囊肿组织及腹膜紫蓝色异位病灶组织。在位内膜取材部位控制在宫体到宫底,异位内膜尽可能取低纤维化部位。常规用10%的中性福尔马林固定24h后低温石蜡包埋,切成4 um厚的石蜡切片,HE染色后光镜下观察组织学形态,筛选组织标本。

1.3 试剂和方法

1.3.1 试剂 鼠抗人CD44v6、ICAM-1和E-cadherin单克隆抗体;免疫组化检测试剂盒为链霉卵白素一过氧化物酶试剂盒通用型.均为美国Zymed公司产品,购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3.2 方法 依照S-P试剂盒说明书方法进行操作:以已知阳性的卵巢癌标本作为阳性对照,磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定 胞膜和/或胞浆内呈现棕黄色颗粒反应为阳性,无棕黄色颗粒反应为阴性。表达强度计分标准参照Remmele and Stegnerde的IRS 3个参数的半定量计数方法。阳性细胞数(A)评分:光镜下随机观察染色清晰的10个高倍视野,共计数1000个腺上皮细胞阳性的百分比,0%(0分),1%~10%(1分),11%~50%(2分),>50%(3分);着色强度(B)评分:未着色(0分),浅黄色(1分),棕黄色(2分),棕褐色(3分)。每例标本最后得分为A项×B项,0分为阴性( - ),1分为 ( + ),2~3分为 ( ++ ),>3分为 ( +++ )。以-和+为低表达,++和+++为高表达来比较各指标在各组中表达是否存在差异。

1.5 统计学分析 采用SPSS11.5统计软件分析。组间样本率的比较采用χ2检验,相关分析采用Spearman等级相关法按非参数统计中的等级分组资料方法检验,计算χ2值和P 值。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

CD44V6、ICAM-1和E-cadherin在各组内膜中的表达见附表。CD44v6阳性细胞的胞浆内被染成棕黄色,胞膜虽有CD44v6表达,但着色比胞浆浅,在EM异位内膜中强表达(P<0.05),而在在位内膜中的表达显著低于正常子宫内膜(P<0.05)。ICAM-1阳性细胞的胞膜被染成棕黄色,且主要表达于3组内膜的腺上皮和腔面上皮细胞,间质细胞上未见有ICAM-1阳性表达,其在EM异位内膜中强表达(P<0.05),而在在位内膜中的表达显著低于正常子宫内膜(P<0.05)。E-cadherin在子宫内膜上仅表达于腺上皮和腔面上皮细胞的胞膜和胞浆中,细胞染色呈强阳性,细胞膜上或/和细胞浆内见棕褐色颗粒样反应物,间质细胞无表达,其在异位内膜和在位内膜中的表达均显著低于正常子宫内膜(P<0.05)。

 

3 讨论

CD44v6是最早被发现的含变异性外显子v6编码序列的CD44分子,是CD44 的一种变异体,属于粘附分子家庭,其表达可改变肿瘤细胞表面粘附分子的构成及功能,有助于肿瘤细胞获得转移潜能。许多临床研究发现,多种恶性肿瘤组织中CD44v6的过度表达与肿瘤的转移及预后高度相关。本试验提示EM患者异位内膜CD44v6表达显著升高,与同期在位内膜和正常子宫内膜比较差异有统计学意义(P<0.05),也提示内异症患者异位内膜CD44v6的表达增强,使异位内膜细胞具有肿瘤细胞特性,逃脱腹腔液中免疫活性细胞的杀伤作用而侵袭腹膜并发生种植。CD44v6参与细胞的伪足形成,影响细胞的迁移过程,增加了异位内膜的游走性,导致异位病灶的广泛播散。同时还参与淋巴细胞归巢、活化及胞内信号传递过程,可引起异位病灶的转移。

ICAM-1(CD54)是含有505个氨基酸的跨膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族,存在于许多细胞的表面和细胞外基质,包括子宫内膜上皮和间质细胞、血管内皮细胞、白细胞等,可与淋巴细胞功能相关抗原1结合,介导细胞毒性细胞免疫反应。ICAM-1的生理作用不仅是调节细胞、细胞间以及细胞和基质之间的黏附作用.而且参与细胞的信号转导与生长移行、肿瘤的转移浸润、免疫炎性反应、血管生长等一系列的生理和病理过程。异位内膜ICAM-1表达更高,进一步提示异位内膜有能力产生免疫抑制,逃避机体免疫系统的监视和自然杀伤细胞的杀伤。有充足的证据表明,内异症患者的腹膜中伴随着炎症反应,病灶局部出现炎性增生性病损。可能异位灶形成过程中在内膜细胞对腹膜侵袭和血管形成有关的细胞因子,如肿瘤坏死因子a、白细胞介素一1、7、干扰素等的调节下出现了异位灶高表达ICAM-1。

E-cadherin 是上皮细胞间的粘附蛋白,是一种分子量为120Ku钙依赖性糖蛋白。本实验中EM异位内膜E-cadherin的表达均明显低于对照组,提示异位内膜组织中E-cadherin表达的缺失与内膜细胞易于从在位解离并侵袭与种植于异位病灶有关。Gaetjie等的研究也支持该结果,他们发现子宫内膜异位组织切片中E-cadherin表达阴性的上皮细胞明显高于正常内膜,取腹腔异位病灶内膜细胞进行体外培养后,发现上皮细胞E-cadherin表达阴性者对胶原有侵袭力,而阳性者无侵袭力,推测E-cadherin阴性表达的细胞代表了移至异常位置而致EM的细胞群。

同时,本试验还提示EM患者在位子宫内膜CD44v6、ICAM-1和E-cadherin呈低表达。这些粘附分子的蛋白表达下降,说明EM患者的子宫内膜已经发生变化,可能导致细胞解聚,使子宫内膜上皮细胞之间以及子宫内膜上皮细胞与细胞外基质之间的粘附作用降低,从而变得易从在位解离、脱落。

在内异症病灶形成过程中,粘附→侵袭→血管形成是被多数学者认定的病理生理过程,即“3 A程序”( attachment-aggrassion-angiogenesis) 。粘附是异位内膜“入侵”盆腹腔腹膜或其他脏器表面的第一步,粘附分子参与了内膜细胞粘附到腹膜间皮细胞的过程。通过对各种粘附分子的研究,利于对EM的发病机制进行深入探讨。

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发表于:2011-03-16 16:16

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